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菌種保藏和復(fù)蘇具體的操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):252 更新時(shí)間:2025-05-27

菌種保藏(culture preservation,culture collection是保持微生物菌株活力和遺傳性狀的關(guān)鍵技術(shù)。在分子生物學(xué)研究中,經(jīng)過(guò)基因編輯或改造的菌種通常非常珍貴且微量,因此需要進(jìn)行妥善的保藏。以下是具體的操作步驟:

 

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菌種保藏

1. 將待保存的菌液與配好的甘油混合液按1:1比例混合,最終達(dá)到20%甘油濃度。配置40%v/v)甘油滅菌水混合液。

2. 2ml離心管或保菌管,加入500微升40%甘油-水混合液。

3. 用移液槍吸取500微升菌液,將槍頭深入液面以下緩緩加入。

4. 將離心管或保菌管放入-80℃冰箱保存。

5. 在保菌管上標(biāo)明日期、菌種、抗性等詳細(xì)信息,以便日后識(shí)別。

菌液復(fù)蘇

1. 復(fù)蘇保存的菌液可以進(jìn)行后續(xù)操作。主要步驟如下:

2. 取含有抗性的LB培養(yǎng)基,每個(gè)培養(yǎng)管裝入約八毫升。所有操作均在無(wú)菌操作臺(tái)進(jìn)行,以防污染。

3. 向每管加入100微升菌液,37℃、180rpm12小時(shí)。

4. 氨芐抗性配置:1g氨芐青霉素鈉溶解于10ml滅菌水中,過(guò)濾后-20℃保存。

5. LB培養(yǎng)基配置:10g氯化鈉、10g胰蛋白胨、5g酵母提取物溶于一升體系中,分裝到250ml錐形瓶,每瓶100ml。Amp抗性:100ml培養(yǎng)基加入100微升氨芐抗性。 

通過(guò)這些簡(jiǎn)單的步驟,你可以有效地保藏和復(fù)蘇珍貴的菌種,為后續(xù)的分子生物學(xué)研究提供堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

 


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